Аналіз ефективності роботи системи сайт-специфічної рекомбінації Cre/LoxP впродовж декількох поколінь трансформантів Arabidopsis thaliana
Journal Title: Вісник Українського товариства генетиків і селекціонерів - Year 2015, Vol 13, Issue 1
Abstract
Мета. Проаналізувати ефективність роботи сайт-специфічної рекомбіназної системи Cre/loxP протягом декількох поколінь трансформантів Arabidopsis thaliana. Методи. Досліджували приріст трансформантів Arabidopsis thaliana вільних від селективних маркерних генів впродовж декількох поколінь. Генетичну трансформацію рослин здійснювали згідно нового підходу до використання сайт-специфічної рекомбіназної системи Cre/loxP під контролем 35S промотору. З цією метою були розроблені два варіанти ДНК-конструкції, що містили маркерний ген gus та ген рекомбінази cre, які обмежувались сайтами ексцизії loxP. Ген стійкості до гігроміцину hptII в обох конструкціях виносився за межі сайтів loxP і в разі здійснення події ексцизії залишався в геномі рослин. Селекцію трансформантів проводили на середовищі Мурасіге та Скуга із додаванням гігроміцину (100 мг/л). Подію рекомбіназної ексцизії маркерних генів у геномі визначали за допомогою гістохімічного аналізу та молекулярно-генетичного аналізу впродовж трьох поколінь трансформантів. Результати. Встановлено, що кількість трансформантів, які не містять маркерних генів, збільшується з кожним наступним поколінням незалежно від варіанта трансформуючої конструкції. Під час проведення молекулярно-генетичного аналізу було виявлено зведення кількості інтегрованої Т-ДНК на геном до мінімуму, що вказує на здатність сайт-специфічної рекомбіназної системи Cre/loxP контролювати кількість подій інтеграції у геномі рослини. Висновки. Запропонований підхід є досить простим у використанні та є гарною можливістю отримання трансформованих рослин, вільних від маркерних послідовностей в геномі.Ключові слова: селективні маркерні гени, видалення маркерних послідовностей, сайт-специфічна рекомбіназа.
Authors and Affiliations
A. S. Sekan
Keywords
Related Articles
- EP ID EP613848
- DOI -
- Views 83
- Downloads 0
Відділ генетики клітинних популяцій Інституту молекулярної біології і генетики НАН України: історія та головні наукові здобутки (до 30-річчя від часу заснування)
У статті коротко розглянуто основні віхи історії Відділу генетики клітинних популяцій, створеного у 1988 р. в Інституті молекулярної біології і генетики постановою Президії АН УРСР. Саме у цьому Відділі та його попередни...
Дупликация dup 24-bp в гене хитотриозидазы CHIT1 у здоровых лиц и пациентов с болезнью Гоше в Украине
Целью нашей работы была оценка распространенности дефицита хитотриозидазной активности у населения Украины путем определения частоты dup 24 bp в гене CHIT1 у здоровых лиц, а также у пациентов с болезнью Гоше для разработ...
Професор Любов Леонідівна Лукаш (до 70-річчя від дня народження)
Висвітлено основні віхи життєвого шляху і найголовніші наукові здобутки та досягнення у галузі генетики і педагогічній роботі члена Президії Українського товариства генетиків і селекціонерів ім. М. І. Вавилова — видатног...
Yaroslav Borysovych Blyum (to 60th anniversary)
Устойчивость к глифосату и глюфозинату в поколениях Т1–Т2 биотехнологических растений рапса (Brassica napus L.)
Цель. Получить биотехнологические растения рапса с трансгенами epsps и bar, которые введены в одном векторе, и изучить наследование чужеродных генов и устойчивость к соответствующим гербицидам в поколениях Т1–Т2. Методы....