Аналіз ефективності роботи системи сайт-специфічної рекомбінації Cre/LoxP впродовж декількох поколінь трансформантів Arabidopsis thaliana
Journal Title: Вісник Українського товариства генетиків і селекціонерів - Year 2015, Vol 13, Issue 1
Abstract
Мета. Проаналізувати ефективність роботи сайт-специфічної рекомбіназної системи Cre/loxP протягом декількох поколінь трансформантів Arabidopsis thaliana. Методи. Досліджували приріст трансформантів Arabidopsis thaliana вільних від селективних маркерних генів впродовж декількох поколінь. Генетичну трансформацію рослин здійснювали згідно нового підходу до використання сайт-специфічної рекомбіназної системи Cre/loxP під контролем 35S промотору. З цією метою були розроблені два варіанти ДНК-конструкції, що містили маркерний ген gus та ген рекомбінази cre, які обмежувались сайтами ексцизії loxP. Ген стійкості до гігроміцину hptII в обох конструкціях виносився за межі сайтів loxP і в разі здійснення події ексцизії залишався в геномі рослин. Селекцію трансформантів проводили на середовищі Мурасіге та Скуга із додаванням гігроміцину (100 мг/л). Подію рекомбіназної ексцизії маркерних генів у геномі визначали за допомогою гістохімічного аналізу та молекулярно-генетичного аналізу впродовж трьох поколінь трансформантів. Результати. Встановлено, що кількість трансформантів, які не містять маркерних генів, збільшується з кожним наступним поколінням незалежно від варіанта трансформуючої конструкції. Під час проведення молекулярно-генетичного аналізу було виявлено зведення кількості інтегрованої Т-ДНК на геном до мінімуму, що вказує на здатність сайт-специфічної рекомбіназної системи Cre/loxP контролювати кількість подій інтеграції у геномі рослини. Висновки. Запропонований підхід є досить простим у використанні та є гарною можливістю отримання трансформованих рослин, вільних від маркерних послідовностей в геномі.Ключові слова: селективні маркерні гени, видалення маркерних послідовностей, сайт-специфічна рекомбіназа.
Authors and Affiliations
A. S. Sekan
Keywords
Related Articles
- EP ID EP613848
- DOI -
- Views 87
- Downloads 0
Сабина Витальевна Чеботарь (к 50-летию со дня рождения)
Системное поражение как модель для отработки технологий генно-клеточной терапии
Цель. Поражение с помощью CCl4 вызывает каскад реакций и состояний, характерных для системных нарушений, вызванных большинством внешних техногенных факторов окружающей среды. Для дальнейшей отработки технологий восстанов...
Генетичний контроль забарвлення гіподерми в оплодні сім’янок соняшнику
Мета. Встановити генетичний контроль пігментації гіподерми у 17 ліній соняшнику. Методи. Використовували методику польового експерименту, методи генетичного аналізу якісних ознак. Результати. Визначено, що у ліній InК630...
X International conference “Factors in experimental evolution of organisms”. Information letter № 2
A few words on the anniversary of the National Academy of Sciences of Ukraine: on the centenary of the establishment