Анализ эффективности работы системы сайт-специфической рекомбинации Cre/loxP на протяжении нескольких поколений трансформантов Arabidopsis thaliana
Journal Title: Вісник Українського товариства генетиків і селекціонерів - Year 2015, Vol 13, Issue 1
Abstract
Цель. Проанализировать эффективность работы сайт-специфической рекомбиназной системы Cre/loxP на протяжении нескольких поколений трансформантов Arabidopsis thaliana. Методы. Исследовали прирост трансформантов Arabidopsis thaliana свободных от селективных маркерных генов на протяжении нескольких поколений. Генетическая трансформация растений осуществлялась согласно новому подходу в использовании сайт-специфической рекомбиназной системы Cre/loxP под контролем 35S промотора. С этой целью были разработаны два варианта ДНК-конструкции, которые имели маркерный ген gus и ген рекомбиназы cre и были ограничены сайтами эксцизии loxP. Ген устойчивости к гигромицину hptII в обеих конструкциях выносился за границы сайтов loxP и в случае события эксцизии оставался в геноме растений. Селекцию трансформантов проводили на среде Мурасиге и Скуга с добавлением гигромицина (100 мг/л). Событие рекомбиназной эксцизии маркерных генов в геноме устанавливали с помощью гистохимического анализа и молекулярно-генетического анализа на протяжении трех поколений трансформантов. Результаты. Установлено, что количество трансформантов, которые не несут маркерных генов, увеличивается с каждым последующим поколением независимо от варианта трансформирующей конструкции. Во время проведения молекулярно-генетического анализа было установлено уменьшение количества интегрированной Т-ДНК на геном до минимума, что указывает на способность сайт-специфической рекомбиназной системы Cre/loxP контролировать количество событий интеграции в геноме растений. Выводы. Предложенный подход является достаточно простым в использовании и есть хорошей возможностью получения трансформированных растений, свободных от маркерных последовательностей в геноме.Ключевые слова: селективные маркерные гены, удаление маркерных последовательностей, сайт-специфическая рекомбиназа.
Authors and Affiliations
A. S. Sekan
Keywords
Related Articles
- EP ID EP613849
- DOI -
- Views 94
- Downloads 0
Генетическая трансформация мягкой пшеницы с использованием векторных конструкций, содержащих гены метаболизма пролина
Цель. Проведение Agrobacterium-опосредованной трансформации in planta мягкой пшеницы сорта Зимоярка с использованием штамма AGLO с векторными конструкциями, содержащими гены метаболизма пролина: pBi2E с целевым геном – д...
Evaluation of the green pea (Pisum sativum L.) collection for presence of carriers of r and rb mutations
Objective. To evaluate the green pea (Pisum sativum L.) collection in order to identify carriers of r and rb mutations in it. Methods. Pea accessions were grown in the field, and seeds were produced under controlled poll...
Long-term videomicroscopy of living cells in vitro: Opportunities and prospects
Aim. Intravital video microscopy of cells is a highly informative approach to the study of cell cultures. Often, this method allows refining and complementing the data obtained by researchers at the visual study of livin...
Molecular-genetic analysis of polymorphic loci c.454-397T/C and c.454-351A/G of the estrogen receptor gene ESR1 in couples with idiopathic infertility
Aim. To establish the association of polymorphic locus 397 T>C and 351 A>G of the gene ESR1 with unsuccessful attempts of extracorporeal fertilization in couples. Methods. DNA from peripheral blood leukocytes was i...
Хронологія Українського товариства генетиків і селекціонерів у з'їздах. До 50-річчя від часу заснування
У статті коротко розглянуто стан генетичної і селекційної науки в Україні напередодні і під час заснування Українського товариства генетиків і селекціонерів ім. М. І. Вавилова (УТГіС), події, що передували і зумовили нео...