Standaryzacja metody oznaczenia ekspresji P-selektyny na płytkach krwi przy pomocy cytometru przepływowego oraz analiza porównawcza z metodą agregometrii impedancyjnej u chorych na ostrą białaczkę szpikową
Journal Title: Postępy Nauk Medycznych - Year 2015, Vol 28, Issue 6
Abstract
Wstęp. Uszkodzenie śródbłonka naczyniowego, stan zapalny lub zaburzenia zakrzepowe powodują aktywację płytek krwi. Aktywowane płytki krwi wykazują ekspresję P-selektyny na swojej powierzchni. Badanie ekspresji P-selektyny na płytkach krwi przy użyciu cytometru przepływowego pozwala na jednoczesną ocenę aktywacji płytek krwi (stanu pobudzenia) i ich reaktywności (czynności).Cel pracy. Opracowanie optymalnych warunków reakcji aktywacji płytek krwi agonistą ADP oraz czasu przechowywania próbek po wyznakowaniu i utrwaleniu. Analiza porównawcza funkcji płytek krwi badanych metodą cytometrii przepływowej i agregometrii impedancyjnej.Materiał i metody. Badaniem objęto 33 pacjentów z ostrą białaczką szpikową (AML) oraz 26 zdrowych dawców. Próbki krwi pobrane od zdrowych dawców inkubowano z 10 μM/l i 20 μM/l ADP przez 2, 5, 10 i 15 min. Płytki znakowano przeciwciałamiCD61-FITC, CD45-PerCP i CD62P-PE. Zbadano stabilność próbki po 2, 3, 4, 5 i 6 godzinach przechowywania. Oceniono czynność płytek krwi u pacjentów z AML metodą cytometryczną i agregometrii impedancyjnej oraz porównano otrzymane wyniki.Wyniki. Po zastosowaniu 20 μM/l ADP przez 2 i 5 minut uzyskano ekspresję P-selektyny: 67,7 ± 3,0% i 67,6 ± 2,3%. Wydłużenie czasu aktywacji powodowało obniżenie udziału komórek CD62P dodatnich: 60,5 ± 3,8% i 56,4 ± 4,1% (p < 0,05). Płytki krwi aktywowane 10 μM/l ADP wykazywały niższy odsetek CD62P (p < 0,05). Wraz ze wzrostem czasu inkubacji wzrastała liczba agregatów (p < 0,05). Oznaczenia ekspresji P-selektyny w 5 punktach czasowych były porównywalne V = 2,21% (p < 0,01). Ekspresja P-selektyny u pacjentów z AML wyniosła 42,6 ± 13,2% (grupa kontrolna 64,0 ± 7,4%) (p < 0,01).Stwierdzono korelację pomiędzy wynikami badań czynności płytek otrzymanymi dwiema metodami R = 0,66 (p < 0,01).Wnioski. Najbardziej efektywne warunki aktywacji uzyskano inkubując płytki z 20 μM/l ADP przez 2 minuty. Wykazano, że po utrwaleniu paraformaldehydem próbki zachowują stabilność do 6 godzin. Stwierdzono obniżenie czynności płytek krwi u pacjentów z AML w stosunku do grupy kontrolnej metodą cytometrii przepływowej oraz agregometrii impedancyjnej.
Authors and Affiliations
Joanna Bienias, Krystyna Jagoda, Mirosław Markiewicz, Agata Wieczorkiewicz-Kabut, Sławomira Kyrcz-Krzemień
Keywords
Related Articles
- EP ID EP55065
- DOI -
- Views 164
- Downloads 0
Zaburzenia psychiczne indukowane steroidami u adolescentów w przebiegu leczenia ostrej białaczki limfoblastycznej
Wstęp. Kortykosteroidy/GKS stanowią ważny element w leczeniu wielu chorób nowotworowych wieku dziecięcego. Mogą prowadzić jednak do wystąpienia wielu niepożądanych objawów somatycznych i behawioralnych, w tym zaburzeń ps...
Retrospektywna ocena przebiegu leczenia i powikłań wyłuszczenia mięśniaków macicy drogą laparoskopii i laparotomii
Wstęp. Mięśniaki macicy mogą być przyczyną obfitych krwawień miesiączkowych, dolegliwości bólowych oraz niepłodności. Miomektomia jest jedyną skuteczną metodą leczenia w grupie pacjentek pragnących zachować płodność. Lap...
Genetyka kliniczna raka prostaty
Badania epidemiologiczne ostatniego dwudziestolecia dowodzą, że czynniki genetyczne mają ogromne znaczenie w etiologii raka gruczołu krokowego, jednakże geny związane z dziedziczną predyspozycją do tego nowotworu pozosta...
Renal failure in a patient with multiple myeloma as thrombotic microangiopathy after gastrointestinal infection
Multiple myeloma despite new drugs is recognized as an incurable disease. Lymphoid neoplasms are characterized by deep secondary immunodeficiency.<br>In patients with a diagnosis of multiple myeloma, immuno...
Hepatocellular carcinoma (HCC) – a role of surgical resection and liver transplantation for the treatment of HCC
Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the common malignant tumors worldwide and is the fifth leading cause of death on a worldwide basis. The major risk factors for development of HCC are now well defined: cirrhosis,...